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色譜異常峰之“色譜雙峰”

更新時間:2016-11-25      點擊次數(shù):2739

色譜雙峰產(chǎn)生的原因及處理

    液相色譜分析中,在色譜柱正常,樣品靈敏度足夠,分析方法合適,色譜峰在出峰時間較短的條件下(不包括梯度),峰型應(yīng)對稱而尖銳。但是,在對樣品了解程度不夠,方法不妥,樣品處理方法及進樣方式不合理下,會出現(xiàn)各種意想不到的問題,而對色譜峰難以作出合理的解釋。色譜雙峰指的是不是一種物質(zhì),但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰,而表明含二種物質(zhì)??蓪⑦@種情況分為三種原因。

1 色譜柱

     如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都雙峰出現(xiàn)(出峰越快,雙峰的可能性會減少),尤其采用單一純物質(zhì)時,可以肯定色譜柱出問題-柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失。

     如果進樣量少,原來色譜柱正常,色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,不一定拖尾,這一般應(yīng)是柱頭受堵,將色譜柱反過來接,用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑,將堵在柱頭的殘留物沖掉,再反過來,一般情況下就可以了。

     當然不反沖,正沖有時也會正常的。如果峰拖尾,雙峰強弱相差不大,柱頭固定相變臟或流失可能性更大,這是可以將進樣那頭擰開,將微孔濾片超聲,柱頭刮去一部分填料,重新填上新填料擰緊,不過這種活,需要一定技術(shù),否則用不了幾次,色譜柱就會應(yīng)柱效很低而報廢。

 

2 溶劑極性及進樣量

     許多液相色譜分析者對此可能不以為然,一般的HPLC的書籍和文獻都不會提到這方面的內(nèi)容,而這確是雙峰產(chǎn)生的一個很重要的原因。目前HPLC分析多為反相色譜,流動相多為甲醇、乙腈、水,加各種添加劑以改善分離性能。

    樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解。*的溶解方法是用流動相溶解,但是很多情況是不一致的。

    當用溶劑極性強度大的試劑,如純甲醇、純乙腈,純乙醇,而分析體系中以水為主,樣品進樣量大,如定量管為20ul,此條件下*可以肯定,單一的純物質(zhì)出雙峰,第二峰比*峰小(每次都不太一樣),且拖尾,保留時間會提前(相對進樣量少而言),將進樣量減少一半以上,峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大,而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。

    上面提到進樣量造成雙峰的一個原因,另一個原因是,進樣量不一定大,但量很大,色譜圖上的雙峰緊靠在一起,基本上齊高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了,這是由于進樣量過大,色譜柱過載造成的。

 

3 樣品的特性

     有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點,存在互變異構(gòu)現(xiàn)象,而這種互變異構(gòu)體無法分開,而是以一個動態(tài)平衡存在。在色譜分析時,在一個特定的條件下,一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,雙峰靠的很近,基本齊高,不拖尾,條件稍一變化,尤其pH,雙峰現(xiàn)象將消失,如紅霉素等。

     有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,但在LC-MS下,用質(zhì)譜檢測器,其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯。

 

 

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